VitroJet新一代冷冻制样利器![产品号外]

 

 

     目前冷冻电镜样品制备主要采用的方法是Blot-Plunge方法,具体步骤是在载网上滴加3微升样品,滤纸吸除多余样品后在载网上留下薄层液体,再投入冷冻剂中完成玻璃化冷冻样品制备。此制样方法有较多的缺点,最显著的两点是样品利用率低可重复性差

     利用率低是因为制样时绝大多数样品被丢弃,导致利用率低于1%。可重复性差是由于制样过程中多个步骤的条件没有被精准控制,导致制样的可重复性差。

     CryoSol公司推出了新一代冷冻样品制备仪VitroJet(广州纳境鼎新科技有限公司是中华区独家代理),它不仅是一台样品制备仪,而且是全方位优化的冷冻样品制备方案,具备多快好四个方面的优点。

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多:集成功能多|制备的样品多
 

01.集成功能多:操作简单,可消除人为和环境因素的影响

    VitroJet是一台全自动冷冻样品制备仪,集成了冷冻样品制备的全步骤,包括载网表面亲水化处理、针式书写笔书写样品,样品厚度检测,喷射式冷冻玻璃化,载网转移和储存。操作者仅需在VitroJet中投入AutoGrid和样品,仪器将按设置参数全自动运行并输出载网盒。

 
集成的亲水化处理
 
 
 

 

02.制备的样品多:使用微升体积样品就可全面优化制样条件

    冷冻样品制备时需摸索诸多条件,比如蛋白质浓度、缓冲液条件、去污剂种类和浓度、pH值、亲水化处理条件、载网种类、制样仪参数等,使用当前常用的冷冻样品制备仪,常受限于样品量,实验者无法全方面优化制样条件。VitroJet采用了针式书写笔技术(Pin-Printing),每个载网仅消耗小于纳升的样品,输入0.5微升便可制作500+的冷冻样品,方便用户全面优化制样条件。

 
针式书写笔书写
 
 
 

    

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快:更快开始|更快结束|冷却速度更快
 

01.更快开始:大大加速实验进程,为难以获得蛋白的课题提供解决方案

     使用目前的冷冻样品制备原理,若想开始冷冻样品制备,则需要纯化出至少几百微升的样品溶液。VitroJet的微量进样能力和超高的可重复性,使得样品体积被压缩到微升级,此两者间差距两个数量级。因为制备蛋白样品的工序十分耗时,所以减少样品用量的VitroJet可以大大加速实验进程。对于蛋白表达量极低而难以攻克的课题,VitroJet为之提供了新的解决方案。

02.更快结束:无需电镜筛查即可获得冰层厚度合适的样品

     VitroJet配有实时反馈系统,针式书写笔书写的样品层厚度可被实时观测记录,同时由于其超高的可重复性,从而无需反复使用筛查电镜检查冰层厚度。相比于目前冷冻样品制备方法的盲冻,VitroJet相当于有了一双眼睛,可以更快结束冷冻制样,获得冰层厚度合适的样品。

 
可视化检查
 
 
 

03.冷冻速度更快:可获得更高品质的冷冻样品

    上一代冷冻样品制备仪采用传统的投入式冷冻技术,样品投入冷冻剂中,载网优先被冷冻,再通过热传导至样品。而VitroJet采用喷射式冷冻技术,样品优先被冷冻,与投入式冷冻技术相比,提高冷却速度三倍有余,因此实验者可获得更高品质的冷冻样品。

 
喷射式冷冻
 
 
 
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好:品质好|可重复性好
 

01.品质好:少量数据即可解析出高分辨结构

    使用VitroJet测试几种蛋白样品,只需几个square的数据既可解出高分辨结构[1]

02.可重复性好:使得原本的冷冻“玄学”成为可重复的冷冻科学!

    通过多次测量相同参数下制备的样品层厚度,实验结果证明VitroJet制备的样品层厚度可控可重复。这使得原本的冷冻“玄学”成为可重复的冷冻科学!

省:省时|省力
 

VitroJet具备多快好的优点,可以省时省力:

  • 节省了蛋白样品制备的时间和试剂

  • 节省了冷冻样品筛查的机时和人力

  • 避免了因为可重复性低导致的无意义劳动

      目前冷冻电镜样品制备方法必将迎来一场变革,VitroJet率先拉开帷幕,全方位的优化冷冻样品制备方案,具备全程自动化、露点控制、针式书写、可视化反馈和喷射式冷冻几个特点,实现了多快好的益处,可以极大的提高样品利用率可重复性

[1] Ravelli, Raimond BG, et al. "Cryo-EM structures from sub-nl volumes using pin-printing and jet vitrification." Nature communications 11.1 (2020): 1-9.

 

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