如何选择一个合适的载网来准备您的冷冻电镜样品
VitroJet 应用笔记
如何选择一个合适的载网来准备您的冷冻电镜样品?
选择预卡环载网
过去的冷冻电镜载网上通常是一层具有蕾丝样孔的薄膜,穿孔排列不规则。
然而,随着技术的发展,现如今可以使用几何图案化的多孔薄膜,可以简化数据收集工作(1)。
制样完成后,载网将被夹持在一个更加坚固的C-ring中形成Autogrid,再送入电镜中收集数据。
目前VitroJet创新的使用预卡环载网来优化冷冻电镜的制样过程,即先卡环,用Autogrid制样,这样可以增加制样的灵活性与安全性,避免载网在制样及转移过程中的损坏。
载网的图像中有网格与多孔薄膜
多孔薄膜中的规则与图案
Autogrid
▲图1
选择合适的载网材料
最常用的载网是铜/金网+非晶状态的碳膜。非晶态碳膜方便现有的冷冻电镜合轴操作,成像时也可清晰地显示碳膜和孔洞内的样品层,但是碳膜会对样品颗粒造成一定的吸附性,进孔率不高,而且碳膜导电性不好,成像质量低。
金载网+晶态金膜也是载网中常用的,全金材料可以提高电导率,降低电子束带来的冰层变形(图2),但是晶态的金膜会给冷冻电镜常规的合轴操作带来不便。
铜/金网+非晶镍钛合金膜近年来被很多客户选择,非晶镍钛合金膜既方便电镜合轴操作又具备金属膜良好的导电性,同时不会吸附样品颗粒,具有良好的进孔率。
此外,还可以选择在载网上额外覆盖一层连续薄膜,比如连续超薄碳膜、石墨烯薄膜、氧化石墨烯薄膜等。
这样做可以让颗粒吸附在薄膜上从而避免接触气液界面,但这种做法可能会导致较严重的取向优势。
(a): 铜网+碳膜的Autogrid
(b): 金网+金膜的Autogrid
▲图2
选择合适的载网规格
除了载网的材料,载网的规格也至关重要,一般来说,选择300目或400目的载网,它们具有更高的稳定性和足够的成像区域。也有些用户会选择200目,相较于300和400目的载网,它的Bar相对稀疏,这样成像区域会更大,但对载网上薄膜的支撑性会差一些。
(a): Vitrojet制样时拍摄的300目的金网金膜
(b): Vitrojet制样时拍摄的200目的铜网碳膜
▲图3. 相同的放大倍数和观测区域
制样时实时监测样品涂抹区域
根据样品类型和成像方案选择合适的载网,VitroJet配备高速高清摄像机,可以清晰的拍摄支持膜和涂抹在上面的样品,这样可以在制样时明确样品制备的冰层厚度和涂抹有样品的区域,因此可以提高用户的制样效率。
▲图4
新载网/样品载体的开发
随着技术的发展,新的样品载体被研发出来,用来克服样品制备的问题,以下提到几种开发新载网的思路:
例如纳米线自吸附载网(3)、
基于MEMS(微电子机械系统)的纳米流控芯片等方式(4),
载体本身就可以控制样品层的厚度。
添加可以黏附颗粒的超薄连续薄膜,会影响颗粒的进孔数量、
分布、取向优势和气液界面等(5)。
而且功能化的连续薄膜会有些对颗粒的特异性吸附(6),
比如his-tag、生物物理研究所新研发的HFMI膜等。
较小的载网支持膜孔直径可以降低成像时电子束的冰层变形,可以提高成像质量。
VitroJet支持多种载网,
您可以根据样品的需要灵活选择。

Nanodim
纳境鼎新·眼见为实
打造中国设计制造的高端显微仪器,助力科研人员推进生命科学的发展和突破。
地址:广州市黄埔区(广州国际生物岛)星岛环南路96号B2栋地上14楼1406室
电话:18811539262 (欢迎咨询报价)
邮箱:info@nanodim.cn
